更新时间2018-05-10 16:21:33
细胞划痕--实验外包
一、传统实验方法
实验步骤：
将所需的材料进行灭菌，包括直尺和marker笔
1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2、在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。
3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。
4、PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5、放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。
注意事项：
1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%）否则细胞增殖就不能忽略。
3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
二、Culture Insert方法
实验步骤：
准备材料：细胞，培养液，culture Insert，镊子。
1，准备细胞悬液：根据细胞类型将细胞悬液稀释至3-7×105个/ml，浓度控制在24小时内融合成单层。
2，在培养插件的每个孔中加入70ul细胞悬液，放入培养箱中培养。
3，细胞贴壁后，使用灭菌的镊子移除培养插件。
4，加入无血清培养基培养。
5，每隔4-6小时拍照记录。
6，根据收集图片使用Wimasis分析实验结果。
三、实验对比
传统实验方法 Culture Insert方法
便捷程度 一般 非常便捷
成本 低 昂贵
划痕效果 划痕宽度不一 划痕宽度一致，可重复使用
损伤 对玻片表面包有一点损伤 可移除的插入元件，对玻片表面包 被几乎没有损伤
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