细胞组分的研究方法

更新时间2018-03-12 06:47:48

主要是分离,定性，定量

离心是细胞分级分离中最常用的技术之一,它们单独使用,或与其他方法结合.例如,对于高尔基体 或过氧化物酶体,大部分操作都要求高速的密度梯度离心.然而,O’Hara Noonan也指出,超速离心也有一些缺点,包括超速离心机是高价的仪器,有些实验室无法接触到.另外,密度梯度难以倾倒是出了名的,其结果是技术依赖的.当然,其他的许多组分也可以只利用试剂和台式仪器来富集.供应商开发出一些试剂盒,能方便快捷地带来高度富集的细胞组分.赛默飞世尔 全新设计的Mem-PER Plus试剂盒,能在一小时之内富集完整的膜相关蛋白.据sigma-aldrich 的产品专家Michael Moehlenbrock介绍,这类试剂盒的原理在很大程度上是类似的.它们往往使用低渗缓冲液给细胞膜带来压力,然后用等渗的提取缓冲液(带或不带还原剂和蛋白酶抑制剂)来维持感兴趣的细胞器.有时也需要机械裂解或去污剂裂解.“各个不同供应商在细胞分级分离试剂盒的设计上都是一致的,而不同细胞组分的差异在于缓冲液组成、裂解试剂和离心速度,”Moehlenbrock说.此类试剂盒的价值并不在于某些秘密试剂,而在于QC系统的一致性和重复性.“细胞分级分离的方法已经过充分鉴定,其操作步骤适用于大部分应用,”Moehlenbrock说.“商业化试剂盒为最终用户带来了简便和效率,同时提供了品质保证的安全性.”通过改变穿插在离心步骤之间的缓冲液的去污剂组分,研究人员可分离不止一个组分.例如,市场上许多试剂盒可收集细胞核和胞浆蛋白.其他试剂盒也带来了三个或四个不同的组分.Cell Signaling Technology的Cell Fractionation Kit产生了细胞质、细胞膜/细胞器以及细胞核/细胞骨架组分,而QIAGEN的Qproteome Cell Compartment Kit分离出细胞质、细胞膜、细胞核和细胞骨架组分.美天旎提供一种不含去污剂的试剂盒,它利用TOM22抗体标记的磁珠来特异分离线粒体.据该公司的技术支持介绍,他们不提供其他亚细胞组分的产品,但客户可以利用自己的抗体来间接分离其他组分.同样地,赛默飞世尔的Cell Surface Protein Isolation Kit标记细胞表面蛋白的外部赖氨酸,它具有一个可切割的生物素衍生物,让此蛋白组分在细胞裂解后可被捕获.