制备金属铅抗原可以用乙酸铅吗

更新时间2020-12-16 08:46:05

制备金属铅的抗原，实验材料中的硝酸铅可以用乙酸铅代替吗？

【摘要】：
本发明公开了一种重金属铅人工抗原的制备方法，以2‑S‑(4‑氨基苯）‑1，4，7三氮杂环壬烷‑1，4，7‑三乙酸（p‑NH2‑Bn‑NOTA，简称NOTA）为螯合剂，将铅离子螯合剂复合物与载体蛋白牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA偶联，制备人工抗原，该方法在原来传统基础上增加了丙二酸二乙酯处理步骤，提高了偶联效率与抗血清效价。对于不同金属，金属性质不同，它们与相同螯合剂的结合比不同，抗血清效价不同；相同金属，它们与不同螯合剂的结合比不同，抗血清效价不同。重金属铅与螯合剂NOTA与丙二酸二乙酯的结合较为稳定且抗血清效价较高。本发明还公开了NOTA在制备重金属铅人工抗原试剂中的应用。
【主权项】：
1.一种重金属铅人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：称取5‑8 mg 2‑S‑(4‑氨基苯）‑1，4，7三氮杂环壬烷‑1，4，7‑三乙酸（p‑NH2‑Bn‑NOTA，简称NOTA），溶解于2 mL 0.01 M、pH7.4 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液，制得NOTA螯合剂溶液，此溶液为A液；称取124.2 mg硝酸铅溶解于5 mL超纯水中，制得浓度为7.5×10‑2M的硝酸铅溶液，此溶液为B液；将150‑200 μL的B液加入到A液中，室温下避光反应3‑5h，此反应液为C液；向C液中逐滴加入500‑800 μL，20 mM的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此反应液为D液；称取20‑30 mg 牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA溶解于3 mL HEPES，室温下磁力搅拌混匀，此反应液为E液；将D液逐滴加入到E液中，室温下避光反应24 h，后加入150‑200 μL丙二酸二乙酯溶液（84.6 mg溶解于2 00μL乙醇中），室温下避光反应1h；反应液先用8 KD的透析袋透析3‑5次，再用30 KD的超滤离心管7000‑9000 rpm离心3‑5次，用5‑10 mL的0.01 M，pH7.4的HEPES溶液复溶，后分装，‑20 ℃低温保存，制得重金属铅人工抗原。